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293-NFKB-RE-Luci(Rluci)细胞株(CS025)

产品说明:

NFKB-RE-Luci细胞是基于293V细胞株构建的单克隆细胞株。该细胞株采用pLV-NFKB-Luci载体通过慢病毒系统构建。细胞中稳定转入由NFKB控制表达的FireflyLuciferase基因,可以通过Firefly Luciferase活性灵活反应NFKB转录因子活性。
细胞稳转Ranilla Luciferase内参基因。可以采用双荧光素酶试剂盒进行检测,也可以仅检测Firefly Luciferase活性。

 

产品资料:

品名:NFKB-RE-Luci(Rluci)细胞株(293)
货号:CS025
原始细胞株:HEK293V(HEK293T亚克隆)
构建方法:转座子构建单克隆筛选
抗性:hygromycin,blasticidin
克隆属性:单克隆细胞株
培养基:高糖DMEM+10%FBS,hygromycin 50 ug/ml,blasticidin3 ug/ml

 

产品包装:

1×10^6 细胞/支,1支。干冰运输。

 

产品验收注意事项:

  1. 细胞收到时应该是冻存状态,并且有干冰保护。如果收到货时细胞已融化,请立即联系我们。
  2. 我们建议您收到产品后立刻储存于液氮,或者对细胞进行复苏,扩增培养并大量冻存。不可保存于-20℃、-80℃冰箱。
  3. 由于运输影响,细胞复苏后1到3代可能出现形态异常,生长缓慢等情况。请传代培养2-3代,待细胞恢复正常再进行实验。

细胞培养基:

DMEM高糖培养基+10%FBS,Penicillin 100ug/ml,Streptomycin 100ug/ml
注意:采用质量可靠的血清非常重要!

 

方法:


试剂配制:

培养基:DMEM高糖培养基+10%FBS,Penicillin 100ug/ml,Streptomycin 100ug/ml,hygromycin 50 ug/ml,blasticidin 3 ug/ml
漂洗液:PBS
消化液:0.25%胰蛋白酶+0.5mM EDTA,溶解于PBS
冻存液:DMEM高糖培养基+40%FBS+10%DMSO

 

初始培养(细胞复苏及培养):

收到细胞请立即复苏。初步检查无污染、细胞存活后请扩大培养,冻存足量细胞以备以后实验使用。

  1. 准备37℃恒温水浴,细胞培养基,60mm细胞培养皿或者25cm培养瓶。
  2. 将细胞冻存管放入37℃水浴中快速融化,期间不断晃动冻存管加速溶解。
  3. 3000g 室温离心5min。
  4. 用70%乙醇清洁冻存管外壁。在超净工作台中弃去上清液。
  5. 用1ml培养基轻轻吹吸重悬细胞沉淀。接种到已准备细胞培养皿,补足培养基至5ml。
  6. 37℃,5% CO2培养24h,观察细胞贴壁情况。
  7. 48h后根据细胞密度换液或传代。
  8. 以后每2-3天传代一次。当细胞达到5×10^6个(约1个10cm培养皿的量),准备冻存液冻存细胞。剩余细胞用于实验。

注意事项:生长密度对于293细胞很重要。细胞密度达到90%(大部分细胞相互接触,细胞间有少量间隙)时需要及时传代。生长过密会造成细胞状态不可逆变差。

 

细胞冻存:

  1. 消化生长良好的细胞,用细胞培养基重悬,细胞密度为1×10^6 /ml左右。
  2. 加入等体积的2×冻存液(80%FBS+20%DMSO)。轻轻吹吸混匀。
  3. 分装到冻存管中。放入程序降温盒过夜。
  4. 将细胞转移到液氮罐中。

NFKB激活实验:

NFKB信号通路可以被LPS激活。

  1. 实验前一天将细胞株接种到24孔板,培养24h。
  2. 加入LPS终浓度10ug/ml,培养24h。
  3. 按照荧光素酶检测试剂盒说明收集细胞,并加入反应底物进行活性检测。

结果见下:


LPS浓度

0

0

0

    10 ug/ml

    10 ug/ml

     10 ug/ml

Fluci值

24865

28456

25784

189387

221897

193684

Rluci值

2855

3207

3852

5621

4289

4736

Fluci/Rluci

8.709282

8.87309

6.693666

33.69276

51.7363

40.89611

 


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