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pLV-NFAT-RE-EGFP慢病毒载体(VL4104)

 

 

产品说明:

NFAT(Nuclear Factor of Activated T cells)转录因子家族在免疫反应中对多种细胞因子的表达有重要作用,也参与了肿瘤免疫、心肌功能调控、凋亡等多种功能。包括钙调蛋白和蛋白激酶C在内的多种信号通路都可以通过NFAT发挥作用。
pLV-NFAT-RE-EGFP载体通过报告基因EGFP检测NFAT信号通路活性。该载体的NFAT-RE启动子由多个NFAT response原件和Minimal启动子组成。NFAT激活启动下游EGFP基因转录。

pLV-NFAT-RE-EGFP载体与在包装载体pH1和pH2(货号KLV3500)的配合可以产生慢病毒。该载体主要用于构建和筛选检测NFAT活性的稳转细胞株构建

 

 

产品资料:

品名:pLV-NFAT-RE-EGFP载体

货号:VL4104

类型:细胞信号通路研究慢病毒载体
基因启动子:NFAT Response promoter
报告基因:EGFP
真核细胞筛选抗性:Puromycin
原核抗性:Ampicillin

 

 

载体图谱:

 

使用步骤简介:

包装慢病毒→慢病毒感染目的细胞株→筛选出NFAT-RE报告基因稳转细胞株→通过稳转细胞株研究NFAT信号通路。

 

 

使用说明:

1、 本产品提供质粒小提产物,约3-5ug质粒。不能直接用于转染实验。收到产品后请转化大肠杆菌感受态,制备转染级质粒。并及时冻存质粒和菌种。
2、 转化时采用含Ampicillin 50-60ug/ml的LB平板及培养基。
3、 真核筛选抗性为puromycin,使用浓度一般为0.5-10ug/ml。不同细胞株的最佳筛选浓度差别很大,需要在实验前通过预实验确定。
实验方法请见 :http://www.inovogen.com/news/2012/0423/115.html

 

注意事项:

1、 该载体不适用于瞬时转染的方法研究信号通路活性。
2、 由于慢病毒载体本身特点,不能在载体中添加polyA终止信号,所以如果病毒转染时恰好整合到细胞基因组内启动子的下游,就会出现本底表达比较高的情况。我们推荐转染后挑选单克隆细胞株,从中选出报告基因本底表达低,对刺激反应灵敏的细胞。

 

PMA+Ionomycin刺激实验结果:

NFAT-RE-EGFP稳转细胞株功能检测实验结果。细胞用PMA 5ng/ml+Ionomycin 1uM刺激24小时,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达。

 

说明书下载:

pLV-NFAT-RE-EGFP(VL4104).pdf

 

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