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pTYNE基因敲除验证载体（CR1011）

 

pTYNE载体中含有起始密码子移位突变，在未发生DNA剪切和突变时不能有效表达EGFP蛋白，不出现荧光。当pCas9/gRNA1载体或pCas9/gRNA3载体表达出的Cas9/gRNA复合物实现对pTYNE质粒的切割后，DNA断裂引发的NHEJ作用即可实现对EGFP蛋白的修复，从而产生荧光。通过荧光细胞数量多少，可以反映基因敲除效率的高低。pTYNE载体也可以用于其他Cas9基因敲除载体或者TALEN、ZNF基因敲除载体的验证。

 

载体特性：

 

类型：哺乳动物细胞基因载体
基因启动子：CMV promoter
标签：突变EGFP
原核抗性：Kanamycin

 




 

 

pTYNE载体多克隆位点序列：


 

pTYNE验证载体构建设计方法：

* 将含有基因敲除靶点的序列通过载体上的酶切位点插入到pTYNE载体中。

* 插入序列中可以含有或者不含启动密码子ATG。当插入序列中由ATG时，应仔细核对EGFP基因的读码框，避免插入序列中的ATG与EGFP基因的读码框一致，从而不能实现pTYNE载体的验证功能。

* 一般插入含有基因敲除靶点的几十个碱基对的序列即可对基因敲除效率进行验证，也可以是包含几个敲除靶点的100-200bp序列。插入序列可以人工合成或者PCR扩增获得。

* 载体的酶切和连接方法与一般的载体构建无异，请按照您的实验室常规操作方法进行即可。

 

说明书下载：

pTYNE.pdf