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293-NFKB-RE-Luci细胞株(CS005)

 

 

产品说明:

NFKB-RE-Luci细胞是基于293V细胞株构建的单克隆细胞株。该细胞株通过慢病毒系统构建。细胞中稳定转入由NFKB控制表达的Luciferase基因和TNFR,该细胞对TNF刺激反应灵敏,可以通过Luciferase活性灵活反应NFKB转录因子活性。NFkappaB信号通路参与调解炎症反应,免疫功能,细胞增殖及凋亡等重要生理功能。

NFKB-RE-Luci细胞株(293)细胞株稳定表达TNFRSF1A,能对TNF刺激产生反应。

 

产品资料:

品名:NFKB-RE-Luci细胞株(293)

货号:CS005
原始细胞株:HEK293V(HEK293T亚克隆)
所用载体:pLV-NFKB-RE-Luci,pLV-TNFRSF1A-HygroVL4103A
构建方法:慢病毒转染构建 单克隆筛选
抗性:puromycin hygromycin
克隆属性:单克隆细胞株

 

细胞形态:

 

产品包装及发货:

1×10^6/支,1支。冻存细胞,干冰发货。货期1~2周。

 

培养方法:

收到细胞请立即复苏。初步检查无污染、细胞存活后请扩大培养,冻存足量细胞以备以后实验使用。

  1. 准备37℃恒温水浴,细胞培养基,60mm细胞培养皿或者25cm培养瓶。
  2. 将细胞冻存管放入37℃水浴中快速融化,期间不断晃动冻存管加速溶解。
  3. 3000g 室温离心5min。
  4. 用70%乙醇清洁冻存管外壁。在超净工作台中弃去上清液。
  5. 用1ml培养基轻轻吹吸重悬细胞沉淀。接种到已准备细胞培养皿,补足培养基至5ml。
  6. 37℃,5% CO2培养24h,观察细胞贴壁情况。
  7. 48h后根据细胞密度换液或传代。
  8. 以后每2-3天传代一次。当细胞达到5×10^6个(约1个10cm培养皿的量),准备冻存液冻存细胞。剩余细胞用于实验。

注意事项:生长密度对于293细胞很重要。细胞密度达到90%(大部分细胞相互接触,细胞间有少量间隙)时需要及时传代。生长过密会造成细胞状态不可逆变差。

试剂配制:

培养基:DMEM高糖培养基+10%FBS,Penicillin 100ug/ml,Streptomycin 100ug/ml
漂洗液:PBS
消化液:0.25%胰蛋白酶+0.5mM EDTA,溶解于PBS
冻存液:DMEM高糖培养基+40%FBS+10%DMSO

 

 

细胞功能试验:

TNF结合细胞的TNF受体,激活NFKB。本实验中通过TNF刺激NFKB-RE-Luci细胞,再用化学发光成像仪检测Luciferase活性。
试剂:TNFa(货号:X1618,北京英茂盛业);萤火虫荧光素酶检测试剂盒(货号:RC005)

  1. 实验前一天将NFKBT-RE-Luci细胞株接种到24孔板。培养24h。
  2. 按图中所示浓度加入TNFa,培养8h。
  3. 按照荧光素酶检测试剂盒说明收集细胞,并加入反应底物进行活性检测。

 

说明书下载:

CS005.pdf

 

 


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