产品资料：

品名：NFKB-RE-Luci细胞株（293）

货号：CS005
原始细胞株：HEK293V（HEK293T亚克隆）
所用载体：pLV-NFKB-RE-Luci,pLV-TNFRSF1A-Hygro（VL4103A）
构建方法：慢病毒转染构建 单克隆筛选
抗性：puromycin hygromycin
克隆属性：单克隆细胞株

细胞形态：

产品包装及发货：

1 X 10^6/支，1支。冻存细胞，干冰发货。货期1~2周。

培养方法：

收到细胞请立即复苏。初步检查无污染、细胞存活后请扩大培养，冻存足量细胞以备以后实验使用。

1. 准备37℃恒温水浴，细胞培养基，60mm细胞培养皿或者25cm培养瓶。

2. 将细胞冻存管放入37℃水浴中快速融化，期间不断晃动冻存管加速溶解。

3. 3000g    室温离心5min。

4. 用70%乙醇清洁冻存管外壁。在超净工作台中弃去上清液。

5. 用1ml培养基轻轻吹吸重悬细胞沉淀。接种到已准备细胞培养皿，补足培养基至5ml。

6. 37℃，5% CO2培养24h，观察细胞贴壁情况。

7. 48h后根据细胞密度换液或传代。

8. 以后每2-3天传代一次。当细胞达到5 x 10^6个（约1个10cm培养皿的量），准备冻存液冻存细胞。剩余细胞用于实验。

注意事项：生长密度对于293细胞很重要。细胞密度达到90%（大部分细胞相互接触，细胞间有少量间隙）时需要及时传代。生长过密会造成细胞状态不可逆变差。

试剂配制：

培养基：DMEM（gibco货号：12100-061）高糖培养基+10%FBS，Penicillin 100ug/ml，Streptomycin 100ug/ml

漂洗液：PBS
消化液：0.25%胰蛋白酶+0.5mM EDTA，溶解于PBS
冻存液：DMEM高糖培养基+40%FBS+10%DMSO

细胞功能试验：

TNF结合细胞的TNF受体，激活NFKB。本实验中通过TNF刺激NFKB-RE-Luci细胞，再用化学发光成像仪检测Luciferase活性。 

试剂：TNFa（货号：X1618，北京英茂盛业）；萤火虫荧光素酶检测试剂盒（货号：RC005）

1. 实验前一天将NFKBT-RE-Luci细胞株接种到24孔板。培养24h。

2. 按图中所示浓度加入TNFa，培养8h。

3. 按照荧光素酶检测试剂盒说明收集细胞，并加入反应底物进行活性检测。

说明书下载：

CS005.pdf