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HT-29-EGFP细胞株(CG016)

品名：HT-29-EGFP细胞株
货号：CG016
包装：1×10^6~1×10^7 1支
细胞株类型：稳定表达EGFP多克隆细胞株
原始细胞：HT-29（人结肠癌细胞）
表达基因：EGFP
抗性：嘌呤霉素

培养基：MEM (含NEAA)（gibco 货号：41500083）培养基+10%FBS，puromycin 1ug/ml
消化液：0.25%胰蛋白酶，0.53mM EDTA
冻存液：50%胎牛血清，40%MEM，10%DMSO
培养条件：37℃，5% CO2

产品简介：
HT-29-EGFP细胞稳定表达EGFP。该细胞株采用慢病毒载体pLV-EGFP-N（货号VL3211）构建，性状稳定。可用作对照细胞，也可用于活体动物成像实验。

细胞株构建方法：
慢病毒载体pLV-EGFP-N（货号VL3211）包装慢病毒后感染HT-29细胞，用嘌呤霉素筛选得到多克隆细胞株。

细胞照片：

收到细胞的处理：
根据客户所在地及发货季节，我们可能采用干冰运输的冻存细胞或者常温运输的培养瓶细胞两种不同形式发货。收到细胞后根据细胞运输类型采用下面两种方式操作。

干冰运输细胞：

1. 37℃水浴融化细胞冻存液，间或摇动冻存管以加速融化过程。待细胞冻存液完全融化后，用70%乙醇消毒细胞冻存管外壁。
2. 室温200g离心5分钟收集细胞。吸去上清。
3. 用1ml培养基重悬细胞。
4. 将细胞接种到6mm培养皿或25cm培养瓶中，补加5ml培养基，37℃ 5%CO2培养。。

常温运输细胞：
在显微镜下观察已收到的细胞，根据细胞状态采取不同方法处理。

1. 如果细胞大部分贴壁且密度不高，则去除细胞原培养基，加入5ml新鲜培养基即可。
2. 如果细胞大部分贴壁且密度较高，则按照常规方法消化细胞，传代分瓶培养。
3. 如果细胞脱落较多，采用下面步骤处理:

a)将原培养基析出装入50ml离心管。200g离心10分钟。

b)去除上清，用5ml培养基重悬细胞，将细胞重悬液接入一新的10cm培养皿培养。

c)在原细胞培养瓶中重新添加5ml培养基进行培养。

d)第二天视细胞密度和状态，换液或传代。    

细胞传代：

1. 传代前将细胞培养液、PBS和胰蛋白酶温浴到37℃。
2. 吸去细胞培养液。
3. 用PBS漂洗一次。
4. 加入适量胰蛋白酶，轻轻晃动细胞瓶，使胰蛋白酶均匀覆盖细胞。吸去胰蛋白酶，将培养瓶放置在细胞培养箱中，37摄氏度消化。在倒置显微镜下观察，看到细胞分开及稍微变圆即可，过度消化可能导致细胞贴壁困难。
5. 加入5ml 细胞培养基，用吸管轻柔吹打分散细胞。
6. 按1:3到1:5接种细胞。

细胞冻存：

1. 将细胞培养液、PBS和胰蛋白酶和冻存液温浴到37℃。
2. 冻存的细胞应为状态好，生长旺盛的细胞。
3. 按细胞传代方法消化细胞，用适量细胞培养液终止消化，重悬细胞。
4. 室温200g离心10分钟收集细胞，用冻存液重悬细胞，并调节浓度至大约1×10^6个细胞/ml。分装到细胞冻存管。
5. 将细胞冻存管放入程序降温盒，-80℃过夜。
6. 将冻存的细胞转入液氮中。