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Luciferase稳定表达Hela细胞株(CL001)

品名：Hela-Luci细胞株
货号：CL001
包装：1 x 10^6~1 x 10^7    1支
细胞株类型：稳定表达FireflyLuciferase（萤火虫荧光素酶）多克隆细胞株
原始细胞：Hela（人宫颈癌细胞株）
表达基因：Firefly Luciferase
抗性：嘌呤霉素

培养基：MEM (含NEAA)（gibco 货号：41500083）培养基+10%FBS，puromycin 1ug/ml
消化液：0.25%胰蛋白酶，0.53mM EDTA
冻存液：50%胎牛血清，40%MEM，10%DMS
培养条件：37℃，5% CO₂            

产品简介：  Hela-Luci细胞稳定表达萤火虫荧光素酶。该细胞株采用慢病毒载体pLV-luci（货号VL3612）构建，性状稳定。可用作萤火虫荧光素酶活性检测中的阳性对照，也可用于活体动物成像实验。

细胞株构建方法：

慢病毒载体pLV-Luci（货号V3612）包装慢病毒后感染293细胞，用嘌呤霉素筛选得到多克隆细胞株。

细胞照片：

Firefly Luciferase检测：  检测试剂：萤火虫荧光素酶检测试剂盒（碧云天，RG005）

检测步骤：  

1. 将Hela-Luci细胞和对照Hela细胞分别接种到96孔板，每组3个孔。

2. 培养24小时后，按照检测试剂盒实验步骤进行检测。

检测结果：

 荧光值：  

增加倍数：

收到细胞的处理：

根据客户所在地及发货季节，我们可能采用干冰运输的冻存细胞或者常温运输的培养瓶细胞两种不同形式发货。收到细胞后根据细胞运输类型采用下面两种方式操作。

干冰运输细胞：

1、   37℃水浴融化细胞冻存液，间或摇动冻存管以加速融化过程。待细胞冻存液完全融化后，用70%乙醇消毒细胞冻存管外壁。

2、   室温200g离心5分钟收集细胞。吸去上清。

3、   用1ml培养基重悬细胞。

4、   将细胞接种到6mm培养皿或25cm培养瓶中，补加5ml培养基，37℃ 5%CO₂培养。  

常温运输细胞：

1、 3000g 10min室温离心收集细胞。

2、用细胞培养基轻柔吹吸重悬细胞。

3、接种到25cm培养瓶或60mm培养皿，补足培养基到5ml。

4、放到细胞培养箱，37℃ 5%CO2培养过夜。

5、第二天观察细胞贴壁情况，换液去除未贴壁细胞，继续培养。

6、细胞生长后及时消化传代，尽早冻存1~2支。

细胞传代：

1. 传代前将细胞培养液、PBS和胰蛋白酶温浴到37℃。

2. 吸去细胞培养液。

3. 用PBS漂洗一次。

4. 加入适量胰蛋白酶，轻轻晃动细胞瓶，使胰蛋白酶均匀覆盖细胞。吸去胰蛋白酶，将培养瓶放置在细胞培养箱中，37摄氏度消化1-2min。加入5ml 细胞培养基，用吸管轻柔吹打分散细胞。

5. 按1:3到1:5接种细胞。

细胞冻存：

•    将细胞培养液、PBS和胰蛋白酶和冻存液温浴到37℃。

• 冻存的细胞应为状态好，生长旺盛的细胞。

• 按细胞传代方法消化细胞，用适量细胞培养液终止消化，重悬细胞。

• 室温200g离心10分钟收集细胞，用冻存液重悬细胞，并调节浓度至大约1 X 10^6个细胞/ml。分装到细胞冻存管。

• 将细胞冻存管放入程序降温盒，-80℃过夜。

• 将冻存的细胞转入液氮中。