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pLV-Flag（C2)单独荧光标签慢病毒载体 (VL3012)

载体特性

类型：慢病毒基因过表达载体
基因启动子：CMV IE promoter
荧光标签：EGFP
真核细胞筛选抗性：Puromycin
原核抗性：Ampicillin

      pLV-Flag(C2)载体是基于HIV1的慢病毒基因过表达载体，采用CMV启动子启动目的基因的表达。该载体用单独的启动子表达EGFP蛋白和嘌呤霉素抗性基因。通过将EGFP基因放在不同的启动子，该载体保留了EGFP蛋白便利性，也避免了融合标签蛋白对目的基因功能产生影响。 pLV-Flag(C2)载体的多克隆位点C端有Flag标签序列，插入外源蛋白后C端将带有Flag标签，以便进行表达检测，蛋白定位及亲和纯化等。 EF1a-HTLV启动子驱动表达EGFP基因和Puromycin抗性基因。可以使用Puromycin筛选出稳定过表达目的基因的细胞。EGFP基因有助于判断病毒包装效率以及感染效率，同时也有助于稳定细胞的筛选。


       pLV-Flag(C2)载体包含了生产慢病毒所必须的病毒原件以及提高病毒滴度及基因表达效率的原件。载体结构紧凑，在保证产生高滴度病毒的同时，载体对外源基因片段的容量达到3kb，多数哺乳动物基因都可以在pLV-Flag(C2)中成功表达。
 

使用说明
     pLV-Flag(C2)载体用于在包括原代培养细胞在内的各种哺乳动物细胞中稳定表达外源基因和Puromycin抗性基因。pLV-Flag(C2)载体与包装载体共转染HEK293T细胞后（包装体系货号KLV3501和KLV3502），产生高滴度复制缺陷的慢病毒颗粒，可以直接用于感染细胞或者纯化浓缩后感染细胞。

载体构建时应注意以下两点：

1. 插入片段应含有起始密码子ATG，不含有终止密码子。

2. 插入片段的读码框应该与载体中的Flag标签一致。

测序引物：
正向引物pEGFP-N-5： TGGGAGGTCTATATAAGCAGAG
反向引物DU-R：CGGGGACTGTGGGCGATGTGCG

原核培养特性
     pLV-Flag(C2)载体为高拷贝质粒，带有氨苄抗性基因，可以在含有100ug/ml氨苄抗生素的LB培养基中增殖。宿主菌可以采用DH5a，JM109，TOP10等常见大肠杆菌菌种。

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VL3405说明书