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pLV-sfGFP(2A)Puro单独荧光标签慢病毒载体 (VL3408)

载体特性
类型：慢病毒基因过表达载体
基因启动子：CMV IE promoter
荧光标签：sfGFP
真核细胞筛选抗性：Puromycin
原核抗性：Ampicillin
 

pLV-sfGFP(2A)Puro 载体是基于 HIV1 的慢病毒基因过表达载体，采用 CMV 启动子启动目的基因的表达。EF1-HTLV 高效启动 sfGFP 和 puromycin 抗性基因表达。pLV-sfGFP(2A)Puro 载体包含了生产慢病毒所必须的病毒原件以及提高病毒滴度及基因表达效率的原件。载体结构紧凑，在保证产生高滴度病毒的同时，载体对外源基因片段的容量达到 3kb，多数哺乳动物基因都可以在 pLV-sfGFP(2A)Puro 中成功表达。

主要载体元件

CMV 启动子：来自疱疹病毒的启动子，在多数真核细胞中高效启动基因表达，是目前使用最广泛的真核基因启动子之一。

EF1-HTLV 启动子：来自人延长因子 1a（Elongation Factor1a，EF1a）启动子和人 T 细胞白血病病毒（HTLV）5’端非编码区的融合启动子。该启动子在多数哺乳动物细胞系中均可以启动基因稳定表达。

sfGFP：GFP 的突变体，荧光亮度高于 EGFP。

Puromycin：嘌呤霉素抗性基因用于成功转染后的稳定细胞药物筛选。

用法说明

pLV-sfGFP(2A)Puro 载体用于在包括原代培养细胞在内的各种哺乳动物细胞中稳定表达外源基因和Puromycin 抗性基因。pLV-sfGFP(2A)Puro 载体与包装载体共转染 HEK293T 细胞后（包装体系货号 KLV3501 和KLV3502），产生高滴度复制缺陷的慢病毒颗粒，可以直接用于感染细胞或者纯化浓缩后感染细胞。

测序引物：

正向引物 pEGFP-N-5：TGGGAGGTCTATATAAGCAGAG

反向引物 DU-R：CGGGGACTGTGGGCGATGTGCG

空载体 PCR 产物大小：256bp

原核培养特性
pLV‐sfGFP(2A)Puro 载体为高拷贝质粒，带有氨苄抗性基因，可以在含有100ug/ml 氨苄抗生素的LB 培养基中增殖。宿主菌可以采用DH5a，JM109，TOP10 等常见大肠杆菌菌种。
 

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