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pLV-EF1a-Luci-N萤火虫荧光素酶慢病毒基因过表达载体(VL3322)

载体特性：

类型：慢病毒基因过表达载体

基因启动子：EF1α promoter

标签：Firefly Luciferase (萤火虫荧光素酶)

真核细胞筛选抗性：Puromycin

原核抗性：Ampicillin

pLV-EF1α-Luci-N载体是基于HIV1的慢病毒基因过表达载体。该载体的多克隆位点位于Luciferase基因上游，在EF1α启动子驱动下表达目的基因和Luciferase的融合蛋白。EF1a启动子来自人类靶向延长因子 1α（EF1A）基因，可在多数种类细胞中稳定表达，尤其是某些CMV启动子会发生沉默的细胞如干细胞等。

PGK启动子驱动表达Puromycin抗性基因。利用本载体包装的慢病毒将表达Puromycin抗性基因，可以方便地使用Puromycin筛选出稳定过表达目的基因的细胞。Luciferase基因有助于追踪感染成功的细胞。也可以用于活体动物成像实验。

本载体可以用于表达目的基因-Luciferase融合蛋白或者单独表达luciferase基因，用于活体动物成像等实验。pLV-EF1α-Luci-N载体包含了生产慢病毒所必须的病毒原件以及提高病毒滴度及基因表达效率的原件。载体对外源基因片段的容量越1.5kb。

用法说明

pLV-EF1α-Luci-N载体与包装载体共转染HEK293T细胞后（包装体系货号KLV3501和KLV3502），产生高滴度复制缺陷的慢病毒颗粒，可以直接用于感染细胞或者纯化浓缩后感染细胞。

正向测序引物：EF-F：ATTCTCCTTGGAATTTGCCCT

反向测序引物：Luci-N-3：gtagcgcttcatggcttt

主要载体元件位置

•5' LTR: 1–634

•Psi (packaging signal): 681-806

•RRE: 1303–1536

•cPPT/CTS: 2028–2144

•EF1α promoter: 2280–3458

•MCS (multiple cloning site): 3562–3614

•Luci :3618–5270

•PGK promoter: 5297–5796

•Puromycin resistance gene:5817–6416

•WPRE:6430–7018

•3' LTR: 7225–7858

•pUC origin: 8388–8976(complementary)

•Ampr(R): 9147–10007(complementary)

原核培养特性

PLV-EF1α-Luci-N载体为高拷贝质粒，带有氨苄抗性基因，可以在含有100 μg/ml氨苄抗生素的LB培养基中增殖。宿主菌可以采用DH5α，JM109，TOP10等常见大肠杆菌菌种。

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VL3322