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稳转细胞系构建

稳转细胞系构建服务可以在指定细胞内稳定表达外源基因，RNA干扰降低内源基因表达，表达特殊反应元件实现特定功能等。该技术可以用于基因功能研究，外源蛋白过表达，重组蛋白生产等。英茂盛业有丰富的稳转细胞株构建经验，拥有慢病毒系统、转座子系统等多种稳转细胞构建技术，能够有效保证细胞株构建成功率。我公司自有基因合成、载体设计和构建、病毒纯化等技术，可以提供稳转细胞株构建的从设计、合成基因、筛选细胞株的一站式服务。咨询热线：023-67630383

慢病毒稳转细胞株筛选

慢病毒方法构建的EGFP标记细胞膜的HEK293细胞株

服务流程：

慢病毒稳转细胞株构建案例

慢病毒具有转染效率高，表达稳定的特点。我们采用慢病毒系统构建了荧光蛋白亚细胞定位稳转细胞株系列和报告基因稳定过表达稳定细胞株系列。

●亚细胞定位稳转细胞株

●荧光蛋白过表达稳转细胞株

●luciferase过表达稳转细胞株

●更多现货细胞株产品

转座子稳转细胞株构建服务

除了常用的慢病毒稳转细胞株构建系统，我们还提供灵活的转座子系统稳转细胞株构建服务。与慢病毒系统相比，转座子系统容量可高达10kb，设计上更加灵活，可以容纳各种启动子、终止子和调节元件等。我们采用该系统构建了大基因的Nav1.7钠通道蛋白稳定过表达细胞株、NFAT等多种信号通路活性检测细胞株等。欢迎特殊构建需求的客户来电咨询。咨询热线：023-67630383

转座子细胞株稳转系统特点

转座子稳转细胞株构建案例：

luciferase信号通路报告细胞株：

有多种方法可以用于检测细胞中信号通路的激活或抑制，比如WB检测信号通路下游蛋白的变化，信号通路关键蛋白的定位变化（比如NFAT会在激活时发生核转移）等。在这些方法中，luciferase报告基因检测法有独特的优势。该方法用luciferase报告基因直接将信号通路的活动通过酶活性变化直接反应出来，具有检测快速、反应敏捷、检测范围宽等其他方法难以比拟的优点。

我们在构建luciferase报告稳转细胞株时，先采用了慢病毒系统。但是由于慢病毒系统无法在载体中插入终止子，造成极高的本底表达，因此检测时对刺激敏感性较低。通过采用灵活的转座子系统，我们在报告基因上游和下游均插入终止信号，将本底表达的荧光数值从数万降低到数百，反应敏感性大幅提高。

比如NFKB-luciferase细胞株（CS030）就是采用转座子系统构建的NFKB信号通路报告细胞株。为了更加灵敏的反应激活信号，我们充分利用了转座子系统的灵活性，添加了多个NFKB反应元件，提高反应程度。并且在上游添加了转录终止信号，以降低本底表达。与慢病毒系统构建的NFKB信号通路的报告细胞株相比，本底信号降低了20倍，灵敏度提高了10倍以上。

• luciferase信号通路报告细胞株

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稳转细胞株筛选实例

• 筛选Cas9稳定过表达293细胞株

常见问题和资料

• 稳定细胞株构建服务常见问题

• 单克隆细胞系和多克隆细胞系特点及选择指南 

• 稳转细胞株筛选抗生素浓度确定方法