微信扫一扫

下载说明书

在线询价

293T-TYNE细胞株(C1208)

货号：C1208
培养基：DMEM高糖培养基+10%胎牛血清
消化液：0.25%胰蛋白酶，0.53mM EDTA
冻存液：50%胎牛血清，40%DMEM，10%DMSO
培养条件：37℃，5% CO2

细胞简介：
293T-TYNE细胞的基因组稳定整合了含有起始密码子移位突EGFP基因。在未发生DNA 剪切和突变时不能有效表达EGFP 蛋白，仅有少量本底荧光表达。核酸酶对突变EGFP 5’端DNA切割后，DNA 断裂引发的NHEJ修复作用即可实现对EGFP 蛋白的修复，从而产生荧光。通过荧光细胞数量多少，可以直观反映基因敲除效率的高低。该细胞株可以用于CRISPR/Cas9、TALEN 或ZNF 基因敲除载体的切割活性验证。

细胞特性：
表达基因：TYNE
基因导入方法：慢病毒
筛选抗生素：puromycin
细胞克隆：多克隆细胞株

原理示意：

TYNE启动子及阳性对照切割靶点序列：

配套阳性对照载体图谱：

阳性对照靶序列：CTTCGAATTCTGCAGTCGA

功能验证： 

pCas9-P及阴性对照pCas9-N分别转染293T-TYNE细胞株，转染后72h荧光显微镜观察细胞荧光。A转染pCas9-N；B转染pCas9-P。

使用注意事项：

1. 293T-TYNE细胞采用嘌呤霉素筛选得到，表达嘌呤霉素抗性基因，而HEK293T细胞本身对G418有较高抗性，因此后续细胞筛选实验中不能采用这两种抗生素。

2. 一般切割成功后48h能检测到绿色荧光，延长检测时间至72小时荧光更加明显。

3. 靶点设计务必位于两个ATG起始密码子之后、EGFP编码序列之前。

细胞培养注意事项：

1. 293T-TYNE细胞对血清要求较高，采用高质量胎牛血清进行培养十分必要，我们采用GIBCO和HYCLONE的胎牛血清培养均能获得满意效果。切勿用新生牛血清或劣质胎牛血清培养。

2. 在细胞培养早期大量冻存细胞十分必要。

3. 293T-TYNE细胞传代培养中应保证细胞密度不高于80%，低密度传代对保持细胞状态极为重要。