产品资料：

品名：NFKB-RE-Luci（Rluci）细胞株（549）
货号：CS026
原始细胞株：A549
构建方法：转座子
抗性：hygromycin
克隆属性：多克隆细胞株
培养基：MEM (含NEAA)（gibco 货号：41500083）培养基+10%FBS，hygromycin 50ug/ml

产品包装：

1 X 10^6 细胞/支，1支。干冰运输。

产品验收注意  事项：

1.细胞收到时应该是冻存状态，并且有干冰保护。如果收到货时细胞已融化，请立即联  系我们。
2.我们建议您收到产品后立刻储存于液氮，或者对细胞进行复苏，扩增培养并大量冻  存。不可保存于-20℃或者-80℃冰箱。
3.由于运输影响，细胞复苏后1到3代可能出现形态异常，生长缓慢等情况。请传代培养2-3代，待细胞恢复正常再进行实验。

细胞形态：

初始培养（细胞复苏及培养）：

收到细胞请立即复苏。初步检查无污染、细胞存活后请扩大培养，冻存足量细胞以备以后实验使用。

1. 准备37℃恒温水浴，细胞培养基，60mm细胞培养皿或者25cm培养瓶。

2. 将细胞冻存管放入37℃水浴中快速融化，期间不断晃动冻存管加速溶解。

3. 3000g    室温离心5min。

4. 用70%乙醇清洁冻存管外壁。在超净工作台中弃去上清液。

5. 用1ml培养基轻轻吹吸重悬细胞沉淀。接种到已准备细胞培养皿，补足培养5ml。

6. 37℃，5% CO2培养24h，观察细胞贴壁情况。

7. 48h后根据细胞密度换液或传代。

8. 以后每2-3天传代一次。当细胞达到5 X 10^6个（约1个10cm培养皿的量），准备冻存部分细胞。剩余细胞用于实验。

细胞冻存：

1. 消化生长良好的细胞，用细胞培养基重悬，细胞密度为1 X 10^6 /ml左右。

2. 加入等体积的2 X 冻存液（80%FBS+20%DMSO）。轻轻吹吸混匀。

3. 分装到冻存管中，放入程序降温盒过夜。

4. 将细胞转移到液氮罐中。

细胞刺激：

1. 消化收集生长良好的细胞，均匀铺至96孔板，培养24小时。

2. 用细胞培养基稀释TNFa至0.4ug/ml，再进行2倍比稀释，共计15个浓度梯度。用稀释好的含TNFa培养基替换原培养基，继续培养12小时。每个刺激浓度3个重复孔。对照组用不含TNFa的培养基换液。

3. 刺激完成后去除培养基，每孔加入15ul裂解液，然后进行检测。

实验结果

细胞刺激：

消化收集生长良好的细胞，均匀铺至96孔板，培养24小时。
用细胞培养基稀释TNFa至0.025ug/ml，分为2组，分别加入DMSO（对照组）和终浓度为5uM的地塞米松（实验组）。用配制好的培养基替换原培养基，继续培养12小时，每个组浓度3个重复孔。
刺激完成后去除培养基，每孔加入15ul裂解液，然后进行检测。

实验结果：