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A549-NFKB-RE-Luci(Rluci)细胞株(CS026)

产品说明:

NFKB-RE-Luci(Rluci)细胞株(A549)表达NFkappaB反应元件控制的萤火虫荧光素酶和作为内参的海肾荧光素酶。细胞采用人肺癌细胞A549构建,采用hygromycin抗生素筛选得到的稳定细胞株。该细胞株可以通过Luciferase反应NFKB信号通路的活性。

 

产品资料:

品名:NFKB-RE-Luci(Rluci)细胞株(549)
货号:CS026
原始细胞株:A549
构建方法:转座子
抗性:hygromycin
克隆属性:多克隆细胞株
培养基:MEM+10%FBS,hygromycin 50ug/ml

 

产品包装:

1×10^6 细胞/支,1支。干冰运输。

 

产品验收注意  事项:

1.细胞收到时应该是冻存状态,并且有干冰保护。如果收到货时细胞已融化,请立即联  系我们。
2.我们建议您收到产品后立刻储存于液氮,或者对细胞进行复苏,扩增培养并大量冻  存。不可保存于-20℃或者-80℃冰箱。
3.由于运输影响,细胞复苏后1到3代可能出现形态异常,生长缓慢等情况。请传代培养2-3代,待细胞恢复正常再进行实验。

 

细胞形态:

 

 

 

培养方法:

细胞培养:

培养基:MEM培养基+10%FBS,hygromycin 1ug/ml。可根据培养习惯加入双抗。
漂洗液:PBS
消化液:0.25%胰蛋白酶+0.5mM EDTA,溶解于PBS
冻存液:MEM培养基+40%FBS+10%DMSO

 

 

初始培养(细胞复苏及培养):

收到细胞请立即复苏。初步检查无污染、细胞存活后请扩大培养,冻存足量细胞以备以后实验使用。

  1. 准备37℃恒温水浴,细胞培养基,60mm细胞培养皿或者25cm培养瓶。
  2. 将细胞冻存管放入37℃水浴中快速融化,期间不断晃动冻存管加速溶解。
  3. 3000g 室温离心5min。
  4. 用70%乙醇清洁冻存管外壁。在超净工作台中弃去上清液。
  5. 用1ml培养基轻轻吹吸重悬细胞沉淀。接种到已准备细胞培养皿,补足培养5ml。
  6. 37℃,5% CO2培养24h,观察细胞贴壁情况。
  7. 48h后根据细胞密度换液或传代。
  8. 以后每2-3天传代一次。当细胞达到5×10^6个(约1个10cm培养皿的量),准备冻存部分细胞。剩余细胞用于实验。

 

细胞冻存:

  1. 消化生长良好的细胞,用细胞培养基重悬,细胞密度为1×10^6 /ml左右。
  2. 加入等体积的2×冻存液(80%FBS+20%DMSO)。轻轻吹吸混匀。
  3. 分装到冻存管中,放入程序降温盒过夜。
  4. 将细胞转移到液氮罐中。

 

功能试验:

1.TNFa刺激实验

 

试剂:                   

TNFa(sigma,H8916),双荧光素酶检测试剂盒(碧云天,RG088S)

 

细胞刺激:

  1. 消化收集生长良好的细胞,均匀铺至96孔板,培养24小时。
  2. 用细胞培养基稀释TNFa至0.4ug/ml,再进行2倍比稀释,共计15个浓度梯度。用稀释好的含TNFa培养基替换原培养基,继续培养12小时。每个刺激浓度3个重复孔。对照组用不含TNFa的培养基换液。
  3. 刺激完成后去除培养基,每孔加入15ul裂解液,然后进行检测。

 

实验结果

2.TNFa刺激抑制实验

 

试剂:

TNFa(sigma,H8916),双荧光素酶检测试剂盒(碧云天,RG088S),地塞米松(sigma,D1756)

 

细胞刺激:

消化收集生长良好的细胞,均匀铺至96孔板,培养24小时。
用细胞培养基稀释TNFa至0.025ug/ml,分为2组,分别加入DMSO(对照组)和终浓度为5uM的地塞米松(实验组)。用配制好的培养基替换原培养基,继续培养12小时,每个组浓度3个重复孔。
刺激完成后去除培养基,每孔加入15ul裂解液,然后进行检测。

 

实验结果:


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