产品资料：

品名：pLV-CRE-Luci载体

货号：VL4102

类型：细胞信号通路研究慢病毒载体
基因启动子：cAMP Response Elements promoter
报告基因：Luciferase
真核细胞筛选抗性：Puromycin
原核抗性：Ampicillin

载体图谱：

使用步骤简介：

包装慢病毒→慢病毒感染目的细胞株→筛选出CRE-Luciferase报告基因稳转细胞株→通过稳转细胞株研究cAMP信号通路。

使用说明：

1、 本产品提供质粒小提产物，约3-5ug质粒。不能直接用于转染实验。收到产品后请转化大肠杆菌感受态，制备转染级质粒。并及时冻存质粒和菌种。
2、 转化时采用含Ampicillin 50-60ug/ml的LB平板及培养基。
3、 真核筛选抗性为puromycin，使用浓度一般为0.5-10ug/ml。不同细胞株的最佳筛选浓度差别很大，需要在实验前通过预实验确定。实验方法请见：http://www.inovogen.com/news/2012/0423/115.html。

构建方法：

将慢病毒载体pLV-CRE-RE-Luci包装为慢病毒，转染293V细胞，用嘌呤霉素进行初步筛选。将筛选后的细胞进行单克隆细胞培养，检测克隆株的EGFP本底表达及对CRE信号通路激活的反应性。最后得到能灵敏反应NFAT激活的克隆株。

注意事项：

1、 该载体不适用于瞬时转染的方法研究信号通路活性。
 2、 由于慢病毒载体本身特点，不能在CRE promoter添加polyA终止信号，所以如果病毒转染时恰好整合到细胞内高表达基因启动子的下游，就会出现本底表达比较高的情况。我们推荐转染后挑选单克隆细胞株，从中选出Luciferase本底活性低，对刺激反应灵敏的细胞。

实验举例：

CRE-RE-Luci细胞株功能检测实验结果。采用pLV-CRE-RE-Luci载体构建的稳定293细胞株（货号：CS005）用forskolin 5uM刺激6小时，收集细胞裂解后加入萤火虫荧光素酶反应底物，化学发光成像仪成像。

说明书下载：

pLV-CRE-Luci-manual.pdf

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