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基因工程改造大肠杆菌BL21(DE3）实现降低固定金属亲和色谱纯化中的大肠杆菌蛋白污染

在大肠杆菌中表达并通过固定化金属亲和层析(IMAC)纯化的重组His标签蛋白通常与天然大肠杆菌蛋白共洗脱，尤其是当重组蛋白以低水平表达时。大肠杆菌污染物显示出对二价镍或钴离子的高亲和力，这主要是由于成簇的组氨酸残基或生物学相关的金属结合位点的存在。为了提高表达的His标签蛋白的最终纯度，我们改造了大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株，其中最常见的污染物或者用替代标签表达，或者突变以降低其对二价阳离子的亲和力。目前的研究介绍了两种大肠杆菌BL21(DE3)衍生物NiCo21(DE3)和NiCo22(DE3)的设计、工程和表征，它们表达内源蛋白SlyD、Can、ArnA和(任选地)AceE，这些蛋白在其C端融合到几丁质结合结构域(CBD)和蛋白GlmS，其中六个表面组氨酸被丙氨酸取代。我们表明，每种大肠杆菌CBD标记的蛋白质保持活性，并且可以使用甲壳质柱流通步骤有效地从IMAC洗脱级分中消除，而GlmS的修饰导致对含镍树脂亲和力的损失。“NiCo”菌株独特地补充了提高重组His标签蛋白纯度的现有方法。

Engineering Escherichia coli BL21(DE3) Derivative Strains To Minimize E. coli Protein Contamination after Purification by Immobilized Metal Affinity Chromatography - PMC (nih.gov)