E.coli 基因敲除、敲入服务

服务概述

大肠杆菌是重要的模式生物，也是工业发酵、重组蛋白表达与合成生物学研究中最常用的底盘菌株。英茂盛业成熟掌握多种大肠杆菌基因编辑技术，可为客户提供大肠杆菌基因敲除、基因敲入、定点突变等全方位大肠杆菌基因编辑服务。

我们的编辑方案适用于常见实验菌株与工业菌株，如 DH5α、TOP10、JM109、HB101、BL21(DE3)、Rosetta(DE3)、MG1655、K-12、W3110、BW25113 等；客户自备的特殊菌株，我们也可评估后制定专属方案。如需 Nissle 1917（EcN）益生菌底盘编辑，请前往Nissle 1917 基因编辑页面。

可编辑菌株

以下常见实验菌株均可进行基因编辑（如需其他菌株请先咨询确认方案兼容性）：

技术方案

针对不同的编辑需求，我们提供三种成熟的技术方案，您可根据目标与预算选择，也可由我们的技术团队推荐：

1. Red 同源重组

Red 同源重组系统来自 lambda 噬菌体，在 pKD46 载体表达 Gam、Exo、Beta 三个蛋白，实现将外源 DNA 同源重组到大肠杆菌基因组。该系统成熟高效，可以实现基因敲入、敲除。我们在 Red 重组系统的基础上加入 Cre-loxP 系统对插入的筛选抗性基因进行清除，基本实现无痕编辑。

• 服务周期：4-5 周

• 服务价格：询价

• 应用范围：基因敲入、基因敲除

2. CRISPR/Cas9

CRISPR/Cas9 定点切割基因组 DNA，然后由 Red 重组酶进行修复。未能修复成功的大肠杆菌因基因组 DNA 断裂死亡，修复成功的个体即编辑成功的个体得以存活。CRISPR/Cas9 系统可以真正做到无痕基因编辑；与 Red 同源重组相比，其独特的无标签筛选阳性克隆机制，在进行需要很高精确度的定点突变中优势明显。

• 服务周期：5-6 周

• 服务价格：询价

• 应用范围：基因敲除、定点突变

3. iStop 碱基编辑

iStop 技术是 CRISPR CBE（碱基编辑）技术的应用。该技术不需要对 DNA 进行双链切割，也不会导致菌体死亡。通过 sgRNA 将碱基编辑酶引导到大肠杆菌基因组的特定位置，造成该靶点位置的 C>T 突变，从而将 CAA、CGA、CAG 等数个密码子突变为终止密码子，导致基因翻译的提前终止，实现基因功能缺失。

该技术对基因组仅进行极小的改动，对生物体的干扰非常小，且无需重组模板，构建周期短、成本较低。

• 服务周期：3-4 周

• 服务价格：询价

• 应用范围：基因敲除

送样要求

为了项目顺利开展，请在送样或下单时提供以下信息：

1. 菌株信息

• 菌株名称与菌株号：如 DH5α、BL21(DE3)、MG1655 等

• 基因型背景：如已知的基因型、表型或特殊修饰系统

• 菌株来源：自备菌株请提供纯化甘油菌或新鲜平板，并注明培养条件与温度

• 抗性背景：菌株携带的抗生素抗性标记（避免与筛选标记冲突）

2. 目的基因信息

• 基因名称与功能：目标基因的名称、功能注释

• 基因序列：提供基因序列或 NCBI 登录号（Accession Number）

• 基因组信息：如为特殊菌株，建议提供基因组序列或参考菌株信息

3. 编辑需求

• 编辑类型：基因敲除 / 基因敲入 / 定点突变 / 多基因编辑

• 目标位点：如已有目标位点、重组臂或 sgRNA 设计请一并提供；没有则由我们免费设计并出具方案

• 敲入内容：敲入的基因或片段序列、表达元件要求（启动子、标签等）

• 特殊要求：无痕编辑要求、交付形式（甘油菌/平板）、加急需求

服务流程

交付内容

• 编辑成功的菌株：2-3 管甘油菌保存

• 实验报告：详细的实验操作流程和结果分析

• 验证数据：PCR 鉴定电泳图、测序验证峰图和序列比对结果

• 菌株信息：完整的基因型说明和培养建议

常见问题