LbCpf1体外酶切试剂盒（PC1500）

 产品简介：

本产品主要用于CRISPR/LbCpf1系统体外酶切实验、CRISPR靶点筛选等实验。可以在体外切割PCR产物、质粒等双链DNA。   试剂盒中提供了LbCpf1蛋白和LbCpf1体外酶切所需试剂，包括原核表达的LbCpf1蛋白，反应缓冲液，以及对照pre-crRNA及其底物DNA。使用该试剂盒可以快速开展LbCpf1体外酶切实验。

产品规格：

活性定义：37℃，30分钟切割1ug1kB DNA双链定义为1个活性单位。
储存条件：-20℃冻存

实验步骤：
！务必采用无RNA酶的耗材进行实验，注意防止RNA酶污染。

1、LbCpf1切割反应：
按照下表配制LbCpf1体外切割反应缓冲液，请按表中顺序加入：

阳性对照反应：

吹吸混合均匀。37℃反应30分钟。

2、产物检测：

快速检测：

1)   在反应体系中加入5μl Cleaner，混匀。55℃孵育5min。（本步骤及以后的步骤不必使用无RNA酶耗材操作）

        2)   取5μl进行凝胶电泳检测（不必加入DNA Loading Buffer）。

乙醇沉淀法检测：

本方案耗时约30min，电泳条带更清晰。

本步骤及以后的步骤不必使用无RNA酶耗材操作

1) 加水将反应产物补足至50ul

2) 加入50ul酚氯仿异戊醇试剂。震荡混匀。

3) 室温12000rpm离心5min。

4) 取上清至新的1.5ml离心管，加入5ul 3M NaAc pH5.2，混匀。

5) 加入110ul无水乙醇，混匀。

6) 4℃ 12000rpm离心10min。

7) 去除上清，加入500ul 70%乙醇，震荡混匀。

8) 4℃ 12000rpm离心5min。

9) 去除上清，空离心2min，12000rpm，用移液器尽量吸去残留液体，开口室温放置2-5min。

10) 加入10-15 ul蒸馏水，震荡溶解沉淀。

11) 取3-5ul进行凝胶电泳检测。

阳性对照：
阳性对照 DNA 为 760bp 双链 DNA。含有单一靶点。切割产物196bp、564bp。

M：DL2000 DNA marker
2：LbCpf1 蛋白加 pre-crRNA 切割 30min
1：LbCpf1蛋白不加 pre-crRNA 切割 30min

产品保存和使用注意事项：

1.LbCpf1蛋白在需冰上融化后使用。注意使用过程中尽量保存在冰上。

2.阳性对照pre-crRNA需用无RNA酶枪头取用，以免RNase污染导致降解。

3.若切割效果不理想，可提高pre-crRNA的含量。

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