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293-NFKB-RE-Luci 信号通路研究细胞株（CS030）

产品资料：

培养基：DMEM（gibco 货号：12100-061）高糖培养基+10%FBS，hygromycin 100ug/ml

产品包装：

1 x 10^6 细胞/支，1支。干冰运输。

产品验收注意事项：

1、 细胞株收到时应该是冻存状态，并且有干冰保护。 如果 收到 货时细胞已融化，请立即联系我们。

2、 我们建议您收到产品后立刻储存于液氮，或者对细胞进行复苏，扩增培养并大量冻存。不可保存于-20℃、-80℃冰箱。

3、 由于运输影响，细胞复苏后 1 到 3 代可能出现形态异常，生长缓慢等情况。请传代培养 2-3 代，待细胞恢复正常再进行实验。

细胞形态：

培养方法：

试剂配制：

培养基：DMEM 高糖培养基+10%FBS，Penicillin 100ug/ml，Streptomycin 100ug/ml，hygromycin100ug/ml

漂洗液：PBS

消化液：0.25%胰蛋白酶+0.5mM EDTA，溶解于 PBS

冻存液：DMEM 高糖培养基+40%FBS+10%DMSO

初始培养（细胞复苏及培养）：

收到细胞请立即复苏。初步检查无污染、细胞存活后请扩大培养，冻存足量细胞以备以后实验使用。

1、 准备 37℃恒温水浴，细胞培养基，60mm 细胞培养皿或者 25cm 培养瓶。

2、 将细胞冻存管放入 37℃水浴中快速融化，期间不断晃动冻存管加速溶解。

3、 2500rpm室温离心 5min。

4、 用 70%乙醇清洁冻存管外壁。在超净工作台中弃去上清液。

5、 用 1ml 培养基轻轻吹吸重悬细胞沉淀。接种到已准备细胞培养皿，补足培养基至 5ml。

6、 37℃，5% CO2 培养 24h，观察细胞贴壁情况。

7、 48h 后根据细胞密度换液或传代。

8、 以后每 2-3 天传代一次。当细胞达到 5 x 10^6 个（约 1 个 10cm 培养皿的量），准备冻存液冻存细胞。剩余细胞用于实验。

注意事项：生长密度对于 293 细胞很重要。细胞密度达到 90%（大部分细胞相互接触，细胞间有少量间隙）时需要及时传代。生长过密会造成细胞状态不可逆变差。

细胞冻存：

1、 消化生长良好的细胞，用细胞培养基重悬，细胞密度为 1 x 10^6 /ml 左右。

2、 加入等体积的 2 x 冻存液（80%FBS+20%DMSO）。轻轻吹吸混匀。

3、 分装到冻存管中。放入程序降温盒过夜。

4、 将细胞转移到液氮罐中。

NFKB信号通路激活实验：

试剂：

实验步骤：

实验结果：

TNF（Sigma，H8916），用 PBS 配制为 10ug/ml

萤火虫荧光素酶检测试剂盒（碧云天，RG005）

检测培养基：DMEM+10%FBS

1、 消化收集生长良好的细胞，均匀铺至 96 孔板，培养 24 小时。

2、 在检测培养基中加入 TNF 至终浓度为 20ng/ml，采用倍比稀释制备 10 组稀释刺激组。用检测培养基作为空白对照。用稀释 好的刺激培养基和对照培养基替换原培养基，继续培养 6 小时。每个刺激浓度 3 个重复孔。

3、 刺激完成后去除培养基，每孔加入 15ul 裂解液，然后按照萤火虫荧光素酶检测试剂盒说明书进行检测。