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293-NFKB-RE-Luci 信号通路研究细胞株(CS030)

 

 

 

产品说明:


NFKB-RE-Luci 细胞株(293)是基于 293V 细胞株构建的单克隆细胞株。该细胞株通过 Firefly Luciferase活性反应 NFKB( 核转录因子 NF-kappaB,NF-KB )信号通路激活。NFKB 信号通路参与调解炎症反应,免疫功能,细胞增殖及凋亡等重要生理功能。

NFKB-RE-Luc 细胞株(293)采用转座子系统构建,经过单克隆挑选,对 NFKB 信号通路激活具有高灵敏的反应。

 

 

产品资料:


品名:NFKB-RE-Luci 细胞株(293)

货号:CS030

原始细胞株:HEK293V(HEK293T 亚克隆)

构建方法:转座子构建单克隆筛选

抗性:hygromycin

克隆属性:单克隆细胞株

培养基:DMEM(gibco 货号:12100-061)高糖培养基+10%FBS,hygromycin 100ug/ml

 

 

产品包装:


1 x 10^6 细胞/支,1支。干冰运输。

 

 

产品验收注意事项:


1、 细胞株收到时应该是冻存状态,并且有干冰保护。 如果 收到 货时细胞已融化,请立即联系我们。
2、 我们建议您收到产品后立刻储存于液氮,或者对细胞进行复苏,扩增培养并大量冻存。不可保存于-20℃、-80℃冰箱。              
3、 由于运输影响,细胞复苏后 1 到 3 代可能出现形态异常,生长缓慢等情况。请传代培养 2-3 代,待细胞恢复正常再进行实验。

 

 

 

细胞形态:


 

 

培养方法:

 


试剂配制:

培养基:DMEM 高糖培养基+10%FBS,Penicillin 100ug/ml,Streptomycin 100ug/ml,hygromycin100ug/ml
漂洗液:PBS
消化液:0.25%胰蛋白酶+0.5mM EDTA,溶解于 PBS
冻存液:DMEM 高糖培养基+40%FBS+10%DMSO

 

 

初始培养(细胞复苏及培养):


收到细胞请立即复苏。初步检查无污染、细胞存活后请扩大培养,冻存足量细胞以备以后实验使用。

 

                         

 


1、 准备 37℃恒温水浴,细胞培养基,60mm 细胞培养皿或者 25cm 培养瓶。
2、 将细胞冻存管放入 37℃水浴中快速融化,期间不断晃动冻存管加速溶解。
3、 3000g 室温离心 5min。
4、 用 70%乙醇清洁冻存管外壁。在超净工作台中弃去上清液。
5、 用 1ml 培养基轻轻吹吸重悬细胞沉淀。接种到已准备细胞培养皿,补足培养基至 5ml。
6、 37℃,5% CO2 培养 24h,观察细胞贴壁情况。
7、 48h 后根据细胞密度换液或传代。
8、 以后每 2-3 天传代一次。当细胞达到 5 x 10^6 个(约 1 个 10cm 培养皿的量),准备冻存液冻存细胞。剩余细胞用于实验。

注意事项:生长密度对于 293 细胞很重要。细胞密度达到 90%(大部分细胞相互接触,细胞间有少量间隙)时需要及时传代。生长过密会造成细胞状态不可逆变差。


 

 

细胞冻存:


1、 消化生长良好的细胞,用细胞培养基重悬,细胞密度为 1 x 10^6 /ml 左右。
2、 加入等体积的 2 x 冻存液(80%FBS+20%DMSO)。轻轻吹吸混匀。
3、 分装到冻存管中。放入程序降温盒过夜。
4、 将细胞转移到液氮罐中。

 

 

NFKB信号通路激活实验:


试剂:

 

 

 

实验步骤:

 

 

  

 

 

实验结果:

 

 

TNF(Sigma,L2630),用 PBS 配制为 10ug/ml
萤火虫荧光素酶检测试剂盒(碧云天,RG005)
检测培养基:DMEM+10%FBS

 

 

1、 消化收集生长良好的细胞,均匀铺至 96 孔板,培养 24 小时。
2、 在检测培养基中加入 TNF 至终浓度为 20ng/ml,采用倍比稀释制备 10 组稀释刺激组。用检测培养基作为空白对照。用稀释 好的刺激培养基和对照培养基替换原培养基,继续培养 6 小时。每个刺激浓度 3 个重复孔。
3、 刺激完成后去除培养基,每孔加入 15ul 裂解液,然后按照萤火虫荧光素酶检测试剂盒说明书进行检测。

 

 

 

 


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