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293-DRD1-CRE-Luci信号通路多巴胺受体反应luciferase报告细胞株(CS032)

 

 

CRE信号通路多巴胺受体反应luciferase报告细胞株

 

产品说明:

DRD1-CRE-Luci细胞株(293)是在CRE-Luci细胞株(293)(货号CS028)中稳转了DRD1基因(dopamine D1 receptor,多巴胺受体D1,基因ID:1812)。该细胞株通过CRE信号通路活性反应多巴胺受体激动或者抑制状态,可用于多巴胺受体相关的研究。细胞株中稳转了由CRE信号通路控制的Fireflyluciferase报告基因,通过检测Fireflyluciferase报告基因活性即可了解多巴胺受体的状态。

 

 

产品资料:

品名:DRD1-CRE-Luci细胞株(293)
货号:CS032
原始细胞株:HEK293V(HEK293T亚克隆)
构建方法:转座子构建单克隆筛选
报告基因:Fireflyluciferase
抗性:hygromycin,puromycin
克隆属性:单克隆细胞株
培养基:DMEM (gibco货号: 12100 - 061) 高糖培养基+10%FBS,hygromycin100ug/ml,puromycin 2ug/ml


注意:采用质量可靠的血清非常重要!

 

产品包装:

1 x 10^6 细胞/支,1支。干冰运输。

 

产品验收注意事项:

  1. 细胞株收到时应该是冻存状态,并且有干冰保护。如果收到货时细胞已融化,请立即联系我们。

  2. 我们建议您收到产品后立刻储存于液氮,或者对细胞进行复苏,扩增培养并大量冻存。不可保存于-20℃、-80℃冰箱。

  3. 由于运输影响,细胞复苏后1到3代可能出现形态异常,生长缓慢等情况。请传代培养2-3代,待细胞恢复正常再进行实验。

 

细胞形态:

培养方法:


试剂配制:

培养基:DMEM高糖培养基+10%FBS,Penicillin 100ug/ml,Streptomycin 100ug/ml,hygromycin100ug/ml,puromycin 2ug/ml
漂洗液:PBS
消化液:0.25%胰蛋白酶+0.5mM EDTA,溶解于PBS
冻存液:DMEM高糖培养基+40%FBS+10%DMSO

 

 

初始培养(细胞复苏及培养):

收到细胞请立即复苏。初步检查无污染、细胞存活后请扩大培养,冻存足量细胞以备以后实验使用。

  1. 准备37℃恒温水浴,细胞培养基,60mm细胞培养皿或者25cm培养瓶。

  2. 将细胞冻存管放入37℃水浴中快速融化,期间不断晃动冻存管加速溶解。

  3. 3000g    室温离心5min。

  4. 用70%乙醇清洁冻存管外壁。在超净工作台中弃去上清液。

  5. 用1ml培养基轻轻吹吸重悬细胞沉淀。接种到已准备细胞培养皿,补足培养基至5ml。

  6. 37℃,5% CO2培养24h,观察细胞贴壁情况。

  7. 48h后根据细胞密度换液或传代。

  8. 以后每2-3天传代一次。当细胞达到5 x 10^6个(约1个10cm培养皿的量),准备冻存液冻存细胞。剩余细胞用于实验。

 

注意事项:生长密度对于293细胞很重要。细胞密度达到90%(大部分细胞相互接触,细胞间有少量间隙)时需要及时传代。生长过密会造成细胞状态不可逆变差。

 

 

细胞冻存:

  1. 消化生长良好的细胞,用细胞培养基重悬,细胞密度为1 x 10^6 /ml左右。

  2. 加入等体积的2 x 冻存液(80%FBS+20%DMSO)。轻轻吹吸混匀。

  3. 分装到冻存管中。放入程序降温盒过夜。

  4. 将细胞转移到液氮罐中。

 

多巴胺激活实验:


试剂:

Dopamine(阿拉丁,D103111),用水配制为1 ug/ml
萤火虫荧光素酶检测试剂盒(碧云天,RG005)
检测培养基:DMEM

 

实验步骤:

  1. 消化收集生长良好的细胞,均匀铺至96孔板,培养24小时。

  2. 在DMEM培养基中加入dopamine至终浓度为500ng/ml,用DMEM进行2倍倍比稀释10组。用DMEM作为空白对照。用稀释好的刺激培养基和对照培养基替换原培养基,继续培养6小时。每个刺激浓度3个重复孔。

  3. 刺激完成后去除培养基,每孔加入15ul裂解液,然后按照萤火虫荧光素酶检测试剂盒说明书进行检测。

 

实验结果:


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