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pLV-NFAT-RE-Rluci-Hygro细胞信号通路研究慢病毒载体(VL4108)

载体特性：

类型：细胞信号通路研究慢病毒载体

基因启动子：NFAT Response promoter

报告基因：Ranilla Luciferase

真核细胞筛选抗性：Hygromycin

原核抗性：Ampicillin

NFAT（Nuclear Factor of Activated T cells）转录因子家族在免疫反应中对多种细胞因子的表达有重要 作用，也参与了肿瘤免疫、心肌功能调控、凋亡等多种功能。包括钙调蛋白和蛋白激酶 C 在内的多种 信号通路都可以通过 NFAT 发挥作用。

pLV-NFAT-RE-Rluci-Hygro 载体通过报告基因 Rluci 检测 NFAT 信号通路活性。该载体的 NFAT‐RE 启动子由多个 NFAT response 原件和 Minimal 启动子组成。NFAT 激活启动下游 Rluci 基因转录。

 pLV-NFAT-RE-Rluci-Hygro 载体与在包装载体 pH1 和 pH2（货号 KLV3500）的配合可以产生慢病毒。该载体主要用于构建和筛选检测 NFAT 活性的稳转细胞株。

使用步骤简介

包装慢病毒→慢病毒感染目的细胞株→筛选出 NFAT‐RE 报告基因稳转细胞株→通过稳转细胞株研究 NFAT 信号通路。

使用说明：

1、 本产品提供质粒小提产物，约 3‐5ug 质粒。不能直接用于转染实验。收到产品后请转化大肠杆菌感受态，制备转染级质粒。并及时冻存质粒和菌种。

2、 转化时采用含 Ampicillin 50‐60ug/ml 的 LB 平板及培养基。

3、 真核筛选抗性为 Hygromycin，使用浓度一般为 0.5‐10ug/ml。不同细胞株的最佳筛选浓度差别很大，需要在实验前通过预实验确定。实验方法请见：http://www.inovogen.com/news/2012/0423/115.html。

注意事项：

1、 该载体不适用于瞬时转染的方法研究信号通路活性。

2、 由于慢病毒载体本身特点，不能在载体中添加 polyA 终止信号，所以如果病毒转染时恰好整合到细胞基因组内启动子的下游，就会出现本底表达比较高的情况。我们推荐转染后挑选单克隆细胞株，从中选出报告基因本底表达低，对刺激反应灵敏的细胞。

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