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HRV 3C Protease（P2035)

产品概述

本品为在大肠杆菌（E. coli）中重组表达并纯化的人鼻病毒14型3C蛋白酶（HRV 3C Protease），也称为PreScission Protease。它能特异性识别八肽序列 Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln↓Gly-Pro，并在谷氨酰胺（Gln）和甘氨酸（Gly）之间进行切割。

本品带有His标签，便于在切割反应完成后通过亲和层析（如Ni柱）将酶去除。

酶活性定义

1个活性单位（1 U）是指在4°C条件下反应16小时，能够从100 μg融合蛋白底物（例如SUMO3与目的蛋白的融合蛋白）上切除超过90%的标签所需的酶量。

保存条件：

长期储存于-80℃，可保存2年; 或小量分装后保存于-20℃，可保存12个月，避免反复冻融。

规格：

产品内容：

实验步骤：
1、HRV 3C Protease切割反应：
由于不同目的蛋白具有不同的特性，所以在实际使用时，建议对酶和目的蛋白的比例进行适当优化，以下是一个简单的针对大部分类型的重组融合蛋白进行酶反应的实验方案。

反应体系如下：

4℃反应16小时。取少量样品进行SDS-PAGE电泳，确认切割效率

注意：低温有助于保持蛋白活性，但反应速度较慢，因此通常选择过夜反应。原核表达的蛋白有时会形成特定的空间结构，导致酶切位点被包裹在蛋白内部而无法被识别。如果发现切不动，可以尝试在室温（25°C）下反应1-2小时，或者在4°C下反应24-48小时，看是否能改善。

2、取少量样品进行SDS-PAGE电泳，确认切割效率：

图 1：底物蛋白来源于自制合成蛋白[His₆] - SUMO3 - LEVLFQ↓GP – EGFP，反应体系为100 ul，含100 ug底物。HRV 3C Protease用量分别为0 U和1 U。底物蛋白分子量为40.2 kDa，在4°C、1× HRV 3C Buffer中反应16小时后，切割产物为13.1 kDa的SUMO3标签和27.1 kDa的EGFP荧光蛋白。

注意事项

1、为获得最好的酶切效果，重组蛋白须为纯化后的蛋白。

2、如果您的融合蛋白是用高浓度咪唑（>200 mM）洗脱的，必须先透析或脱盐降低咪唑浓度。高浓度咪唑会抑制HRV 3C酶的活性。

3、HRV 3C对EDTA有较好的耐受性（1-5 mM范围内活性不受明显影响），配套缓冲液中的EDTA浓度已在此范围内，可直接使用。

4、Zn²⁺、AEBSF和Chymostatin会抑制酶活性，请勿添加。

5、本产品仅限科研用途使用, 不可用于临床诊断或治疗。