优惠信息
大肠杆菌基因编辑
病毒表达
CRISPR/Cas9
稳转细胞株筛选
载体构建服务
lncRNA
技术中心
关于我们
产品
品名：Cre-RE-Luc细胞株（293）
货号：CS028
规格：
细胞来源：HEK293V（HEK293T亚克隆）
表达基因：FLuci
构建载体：
构建方法：转座子构建单克隆筛选
克隆属性：单克隆细胞株
抗性：hygromycin
简介：CRE 是转录因子CREB（CRE binding protein）的DNA 结合序列。CREB 磷酸化后结合到CRE，从而启动下游基因转录，产生cAMP 信号通路激活的多种反应。cAMP 信号通路参与多种生物功能调控，如细胞增殖、心率及记忆等。Cre-RE-Luci细胞是基于293V细胞株构建的Cre信号通路报告单克隆细胞株。该细胞株采用转座子系统，在293V细胞中稳定转入Cre激活的Fireflyluciferase基因，可灵敏报告Cre信号通路的活性。该细胞株是经过单克隆筛选的高灵敏克隆株，本底表达低，对刺激反应灵敏。细胞性状稳定。
产品资料：
培养基：DMEM（gibco 货号：12100-061）高糖培养基+10%FBS，hygromycin 400ug/ml
注意：采用质量可靠的血清非常重要 ！
细胞形态：
产品包装及发货：
1 x 10^6 细胞/支，1支。干冰运输。
培养方法：
试剂配制：
培养基：DMEM高糖培养基+10%FBS，Penicillin 100ug/ml，Streptomycin 100ug/ml，hygromycin 400ug/ml
漂洗液：PBS
消化液：0.25%胰蛋白酶+0.5mM EDTA，溶解于PBS
冻存液：DMEM高糖培养基+40%FBS+10%DMSO
初始培养（细胞复苏及培养）：
收到细胞请立即复苏。初步检查无污染、细胞存活后请扩大培养，冻存足量细胞以备以后实验使用。
准备37℃恒温水浴，细胞培养基，60mm细胞培养皿或者25cm培养瓶。
将细胞冻存管放入37℃水浴中快速融化，期间不断晃动冻存管加速溶解。
2500rpm 室温离心5min。
用70%乙醇清洁冻存管外壁。在超净工作台中弃去上清液。
用1ml培养基轻轻吹吸重悬细胞沉淀。接种到已准备细胞培养皿，补足培养基至5ml。
37℃，5% CO2培养24h，观察细胞贴壁情况。
48h后根据细胞密度换液或传代。
以后每2-3天传代一次。当细胞达到5 x 10^6个（约1个10cm培养皿的量），准备冻存液冻存细胞。剩余细胞用于实验。
注意事项：生长密度对于293细胞很重要。细胞密度达到90%（大部分细胞相互接触，细胞间有少量间隙）时需要及时传代。生长过密会造成细胞状态不可逆变差。
细胞冻存：
消化生长良好的细胞，用细胞培养基重悬，细胞密度为1 x 10^6 /ml左右。
加入等体积的2 X 冻存液（80%FBS+20%DMSO）。轻轻吹吸混匀。
分装到冻存管中。放入程序降温盒过夜。
将细胞转移到液氮罐中。
产品验收注意事项： |
|
CRE 信号通路激活实验：
试剂： | Forskolin（碧云天，S1612），用DMSO配制为1mM 检测培养基：DMEM含0.5%FBS，0.5%DMSO
|
实验步骤： |
|
实验结果： |
|
渝公网安备50010502504053
