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pLV-EF1a-(T2A)puro慢病毒基因过表达载体(VL3407)

Multiple Cloning Site  

MCS 及其上下游序列：

载体特性：

类型：慢病毒基因过表达载体

基因启动子：EF1α promoter

自我剪切肽：T2A

真核细胞筛选抗性：Puromycin

原核抗性：Ampicillin

pLV-EF1a-(T2A)puro载体是基于HIV1的慢病毒基因过表达载体。该载体的克隆位点位于EF1α启动子下游，插入的目的蛋白和Puromycin抗性基因通过2A肽链连接成为一个ORF，在CMV启动子驱动下mRNA翻译成一个融合蛋白，然后自动切割为单独的目的基因蛋白和puromycin抗性基因蛋白。自动切割效率高于95%。

该载体将抗性基因和目的基因在同一个启动子表达，能更高效地实现对目的基因的筛选。与其他使用单独启动子表达抗性基因的载体相比，该载体由于节约了一个启动子，有了更大的载体容量，最大可表达高达4kb以上的目的基因。

pLV-EF1a-(T2A)puro载体包含了生产慢病毒所必须的病毒原件以及提高病毒滴度及基因表达效率的原件。可以与2代包装载体或者我公司的包装载体pH1、pH2配合生产慢病毒。

用法说明

pLV-EF1a-(T2A)puro载体用于在包括原代培养细胞在内的各种哺乳动物细胞中稳定表达外源基因和Puromycin抗性基因。pLV-EF1a-(T2A)puro载体与包装载体共转染HEK293T细胞后（包装体系货号KLV3501和KLV3502），产生高滴度复制缺陷的慢病毒颗粒，可以直接用于感染细胞或者纯化浓缩后感染细胞。

测序引物：

正向引物pEF-F：TCAAGCCTCAGACAGTGGTTC

反向引物Puro-N-3：TGGCGGGGTAGTCGGCGAA

空载体 PCR 产物大小：325bp

原核培养特性

pLV-EF1a-(T2A)puro载体为高拷贝质粒，带有氨苄抗性基因，可以在含有100 μg/ml氨苄抗生素的LB培养基中增殖。宿主菌可以采用DH5α，JM109，TOP10等常见大肠杆菌菌种。