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Polyfect-C转染试剂(P2011)



产品简介:
Polyfect-C转染试剂是新一代纳米转染试剂,适合用于多数贴壁动物细胞系,悬浮动物细胞系以及多数原代细胞。具有细胞毒性低,操作简便,血清和抗生素对转染无影响,质粒和转染试剂用量少等显著优点。该转染试剂操作简便,孵育时间短,转染效果可靠。

 

规格:

货号

规格

P2011-0.5

0.5ml

P2011-1

1ml

 

 

保存:
本品在4℃可保存3个月,如需长期保存可在-20℃冻存。
冻融后缓慢吹吸混匀,切勿剧烈震荡

 

转染前注意事项:

  1. 转染密度以80%-95%比较合适。

  2. 如果长时间未使用转染试剂,使用前需吹吸混匀转染试剂。

  3. 转染复合物形成后血清和抗生素对转染无影响,但形成转染复合物过程中不能有血清和抗生素。

  4. 不同细胞培养装置的转染试剂和质粒用量见下表。表中的用量根据HEK293V细胞优化。如果用Polyfect-C转染其他细胞,也可以参照表中的量进行。

细胞培养装置

DNA用量(ug

稀释DNA的稀释液体积(ul

Polyfect-C转染试剂体积(ul

稀释Polyfect-C的稀释液体积(ul

细胞培养液总体积(ml

96孔板

0.1

5

0.2

5

0.1

24孔板

0.5

12.5

1

12.5

0.5

12孔板

1

25

2

25

1

6孔板

2.5

62.5

5

62.5

2

6cm

5

125

10

125

5

10cm

15

375

30

375

10


 

操作步骤:


下面以10cm平皿为例说明转染步骤。

  1. 转染前24小时,将293V细胞以 4-5×10 6 /10cm平皿密度接种,加入10ml培养基37℃,5% CO2培养。细胞转染前密度应达到90%。

  2. 吹吸混匀Polyfect-C转染试剂。

  3. 准备2个离心管,按以下顺序分别制备质粒和转染试剂稀释液。

离心管1(质粒DNA

 

离心管2(转染试剂)

质粒1ug

 

Polyfect-C转染试剂30 ul

DMEM无血清培养基X μl

 

DMEM无血清培养基345ul

总体积375ul

 

总体积375ul

 

 

    • 充分混匀。

    • 将转染试剂稀释液(离心管2)加入质粒DNA溶液(离心管1)中,立刻充分混匀。注意加入顺序非常重要。

    • 室温孵育转染混合液5分钟。混合液可以在2小时内保持稳定。

    • 将转染混合液逐滴加入步骤1准备的细胞培养皿,前后晃动培养皿,充分混匀。

    • 37℃培养。

    • 如果需要换液,可在转染后4-6小时进行,不会影响转染效果。

    • 继续培养24-48小时进行细胞检测或其他操作。

     


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