一、试剂 1.细胞培养基及其他细胞培养所需试剂。 2.转染辅助试剂Polybrene（用水配制为6mg/ml，-20℃冻存）。 3.Cas9表达慢病毒（ 制备方法见Cas9慢病毒包装实验 ）。 4.嘌呤霉素或者G418。 二、实验步骤 1、转染前24小时将293T以适当密度铺板到12孔板。感染...

原理 分析转化的功能和表达需要 DNA 稳定转染至宿主细胞染色体。外源基因进入细胞后，部分能够通过细胞质进入细胞核内，根据细胞类型，至多 80 ％的进入核内的外源 DNA 得到瞬时表达。极少数情况下，进入细胞的外源 DNA 通过系列非同源性分子间重组核连接，...

在使用G418、潮霉素B或嘌呤霉素筛选稳定细胞系细胞之前，需要先通过梯度实验确定适合该类细胞的最佳药物浓度。对于一些常见的细胞系，通常可以在资料中找到推荐的药物浓度。例如Hela细胞用400 g/ml的G41或1 g/ml的嘌呤霉素进行稳定细胞株筛...