实验原理 pTYNE载体 在EGFP编码框上游有2个错码的ATG起始密码子，由于不能有效地启动EGFP表达， pTYNE 转染细胞仅能发出很微弱的荧光。 pCas9/gRNA3载体 需要成对发挥作用。我们根据 pTYNE载体 设计构建了 pCas9/gRNA3 阳性对照载体 pCAS9-Pf、pCas9-Pr 。由...

实验原理 pTYNE载体 在EGFP编码框上游有2个错码的ATG起始密码子，由于不能有效地启动EGFP表达， pTYNE 转染细胞仅能发出很微弱的荧光。我们根据pTYNE载体上错码的EGFP的上游区域设计并构建了Cas9蛋白基因敲除实验的阳性对照gRNA表达载体pGR-Hygro-P。 pTYNE...

实验原理 TP53是重要的抑癌基因。在多种肿瘤中都能发现TP53基因突变及功能丧失。我们将针对TP53基因设计的靶点构建到pCas9/gRNA1载体，转染293T细胞，构建了TP53基因敲除293T细胞系。 1、本实验基因敲除原理：pCas9/gRNA1载体表达gRNA和Cas9蛋白。将靶点序列...

一、试剂 1.细胞培养基及其他细胞培养所需试剂。 2.转染辅助试剂Polybrene（用水配制为6mg/ml，-20℃冻存）。 3.Cas9表达慢病毒。 4.嘌呤霉素或者G418。 二、实验步骤 1、转染前24小时将293T以适当密度铺板到12孔板。感染病毒时细胞密度在80%左右。 2、取出...

Cat. No.CR1011 pTYNE载体中含有起始密码子移位突变，在未发生DNA剪切和突变时不能有效表达EGFP蛋白，不出现荧光。当 pCas9/gRNA1载体 或 pCas9/gRNA3载体 表达出的Cas9/gRNA复合物实现对pTYNE质粒的切割后，DNA断裂引发的NHEJ作用即可实现对EGFP蛋白的修复...

pCas9/gRNA1 货号：CR1001 pCas9/gRNA1载体用于动物细胞基因敲除。该载体用CRISPR系统进行基因敲除，通过在同一个质粒中表达Cas9蛋白和gRNA，实现单独转染一个质粒即可产生基因敲除效果。敲除效率可以与TALEN系统相当，而基因敲除质粒的构建则相对简便很多。...

pCas9/gRNA3载体用于动物细胞基因敲除。该载体表达的Cas9Nickase蛋白是野生Cas9蛋白的D10A突变体。...

pLV-Cas9-Puro 货号： CR2001 载体类型： Cas9 蛋白慢病毒表达载体 原始载体： pLV-Puro 原核抗性：氨苄青霉素 真核抗性：嘌呤霉素 过表达基因： Cas9 蛋白 克隆酶切位点： EcoRI ， BamHI 插入基因大小： 4164bp 使用说明： 1、 用于构建稳定表达 Cas9 蛋白...

style type=text/css !-- .STYLE1 { color: #FF0000; font-weight: bold; } .STYLE2 {color: #FF0000} -- /style pstrong货号：/strongstrongC1203/strongbr strong培养基：/strongDMEM高糖培养基+10%胎牛血清 br strong消化液：/strong0.25%胰蛋白酶，0.53m...

货号：C1204 培养基：DMEM 高糖培养基+10%胎牛血清 消化液：0.25%胰蛋白酶，0.53mMEDTA 冻存液：50%胎牛血清，40%DMEM，10%DMSO 培养条件：37℃，5%CO 2 细胞简介： 293T‐Cas9Nick 细胞是用 HEK293T 细胞构建的稳定表达 Cas9 蛋白的细胞株。在转入 gRNA 表...

一、试剂准备 1、Cas9过表达慢病毒载体选择。 货号 名称 CR2001 pLV-Cas9-Puro CR2002 pLV-Cas9-Neo CR2003 pLV-Cas9Nick-Puro CR2004 pLV-Cas9Nick-Neo 我们现提供4种表达Cas9 蛋白的慢病毒载体，您可以根据抗生素要求和基因敲除实验设计进行选择。 1）抗生...

使用时pEGFP/puro与pCas9/gRNA1载体或者pCas9/gRNA3载体共转染，用荧光标签或者嘌呤霉素对转染后的细胞进行初步筛选，可以显著提高基因敲除成功细胞的阳性率，减少后续细胞克隆检测数量。这个步骤对于转染效率较低的细胞尤其有效。...

pEGFP/Puro 货号：CR1020 pEGFP/Puro表达人源密码子优化的EGFP基因和puromycin抗性基因，可用于与pCas9/gRNA载体共转染细胞，用荧光标签或者抗生素筛选阳性细胞。，可以配合Cas9表达载体或者Cas9过表达细胞系实现基因敲除。载体表达的Hygromycin抗性基因可以...

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CRISPR/Cas9基因编辑技术可以在各种生物中实现基因组编辑。我们采用大肠杆菌Cas9基因编辑试剂盒（CR3010），实现了敲除BL21菌种中的lacZ（β-半乳糖苷酶）基因，敲除效率高达90%。...