实验原理 TP53是重要的抑癌基因。在多种肿瘤中都能发现TP53基因突变及功能丧失。我们将针对TP53基因设计的靶点构建到pCas9/gRNA1载体，转染293T细胞，构建了TP53基因敲除293T细胞系。 1、本实验基因敲除原理：pCas9/gRNA1载体表达gRNA和Cas9蛋白。将靶点序列...

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我们根据pTYNE载体的序列设计了pCas9/gRNA1对照阳性质粒pCas9-P，该质粒上的gRNA与pTYNE上EGFP编码区上游结合。pCas9-P表达的Cas9蛋白和gRNA组合现对pTYNE载体切割，经细胞修复后，突变的pTYNE将表达出读码框正确的EGFP蛋白，发出明亮的绿色荧光。...

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poly（rA）双螺旋结构 1953年，弗朗西斯克里克和詹姆斯沃森发现了脱氧核糖核酸（DNA）的双螺旋结构。自此，科学界掀起了一场对这个生命体最基本构建模块进行图绘、研究和测序的革命。 DNA对代代相传的遗传物质进行编码。要将DNA中编码的信息制成生命所必需的...

siRNA合成的方法主要包括： 1、化学合成 2、体外转录 3、长片断dsRNA经RNaseIII类降解（如Dicer、E.coli、RNaseIII） 4、siRNA表达载体或者病毒载体在细胞中表达siRNAs 5、PCR制备的siRNA表达框在细胞中表达 前三种方法主要都是体外制备siRNAs，并且需要专门...

近年来的研究表明,一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型, 称为RNA干扰（RNA interference,RNAi）.siRNA（small interfering RNAs）就是这种短片断双链RNA分子,能够以序列...

若诊断结果显示某人患有一种大脑肿瘤多形性胶质母细胞瘤(GBM),这对他往往是具有打击性的,因为可用于治疗这种肿瘤的方法很少,并且该癌症具有较差的预后.那些可以消除其他恶性肿瘤的疗法,例如化疗或外科手术,对于GBM患者来说只是可以延长一点有限的生命罢了....

英茂盛业慢病毒RNA干扰载体构建方法.可以构建我公司慢病毒RNA干扰载体pLVshRNA-EGFP、pLVshRNA-Puro和双标RNA干扰载体pLVshRNA-EGFP（2A）Puro。...

RNA干扰靶序列设计的方法最初由 Elbashir et.al 2001 发表。之后由于发现了RISC与siRNA结合的偏好，设计干扰效果优秀的siRNA的成功率大大增加。我们主要采用 Pei and Tuschl （ N2[CG]N8[AUT]N8[AUT]N2 ）发表的设计原则进行设计。对初步筛选出的所有符合条...

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