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pLV-TRE-EGFP-puro可诱导慢病毒表达载体(EL6003)

载体类型：慢病毒表达载体

真核细胞筛选抗性：Puromycin

原核抗性：Ampicillin   

基因启动子：TRE promoter

过表达基因：EGFP蛋白

使用说明：

1、该载体在TRE启动子控制下表达EGFP蛋白。

2、稳转细胞筛选

该载体为慢病毒载体，与包装载体pH1、pH2（货号KLV3500）配合生产慢病毒，转染目的细胞。然后用嘌呤霉素筛选稳定细胞株。

3、诱导表达

该载体中的目的蛋白表达依赖TetON蛋白调节。配套pLV-TetON-Neo载体可实现EGFP蛋白可诱导表达。诱导剂可选Doxycline，诱导浓度50-500ng/ml（根据细胞类型不同有较大区别）。

4、配套材料：

慢病毒包装载体：pH1、pH2（货号KLV3500）

包装细胞：HEK293V（货号C1201）

TetOn调节蛋白表达载体：pLV-TetON-Neo（货号CR3102）或pLV-TetON-Bsd（货号EL6001）

可诱导目的基因表达载体：pLV-TRE -puro（货号EL6010）

筛选抗生素：puromycin

原核抗生素：氨苄青霉素

诱导剂：四环素或者Doxycline

可诱导细胞株构建案例

使用慢病毒系统构建EGFP诱导表达细胞株

本实验采用pLV-TetON-Bsd表达TetON调节蛋白，采用pLV-TRE-EGFP-puro表达受Tet调控的EGFP蛋白。




实验内容：

1、将pLV-TetON-Bsd和pLV-TRE-EGFP-puro分别包装为慢病毒。

2、pLV-TetON-Bsd慢病毒转染293V细胞，用Blasticidin筛选稳定细胞株293-TetON。

3、pLV-TRE-EGFP-puro慢病毒转染293-TetON细胞，用puromycin筛选稳定细胞株293-TetON-EGFP（货号：CG018）。




细胞图片：




DOX^--



DOX 100ng/ml