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我们根据pTYNE载体的序列设计了pCas9/gRNA1对照阳性质粒pCas9-P,该质粒上的gRNA与pTYNE上EGFP编码区上游结合。pCas9-P表达的Cas9蛋白和gRNA组合现对pTYNE载体切割,经细胞修复后,突变的pTYNE将表达出读码框正确的EGFP蛋白,发出明亮的绿色荧光。...
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通过采用Cas9 D10A突变蛋白,对DNA进行单链而不是双链切割,解决CRISPR/gRNA系统中的脱靶问题。...
实时荧光定量PCR(RealtimePCR,QPCR)技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程, 最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)技术实现了PCR从定性到 定量的飞跃,它以...
pLV-Dual载体是基于HIV1的慢病毒基因过表达载体,可以用于慢病毒表达基因或直接转染细胞表达基因。载体中含有CMV启动子和SV40启动子,可以实现在同一个载体中表达2个基因。PGK启动子启动Puromycin抗性基因表达。利用本载体包装的慢病毒将表达Puromycin抗性基...
poly(rA)双螺旋结构 1953年,弗朗西斯克里克和詹姆斯沃森发现了脱氧核糖核酸(DNA)的双螺旋结构。自此,科学界掀起了一场对这个生命体最基本构建模块进行图绘、研究和测序的革命。 DNA对代代相传的遗传物质进行编码。要将DNA中编码的信息制成生命所必需的...
TALEN 敲除小鼠 P53 基因及 talen 质粒活性验证 验证原理: 将 talen 靶点附近序列从基因组上扩增,克隆到验证质粒中 EGFP 基因上游,与 EGFP 基因融合。 Talen 质粒对与验证质粒共转染 293V 细胞,表达的 talen 蛋白对验证质粒上靶点序列进行切割,造成 EGF...
siRNA合成的方法主要包括: 1、化学合成 2、体外转录 3、长片断dsRNA经RNaseIII类降解(如Dicer、E.coli、RNaseIII) 4、siRNA表达载体或者病毒载体在细胞中表达siRNAs 5、PCR制备的siRNA表达框在细胞中表达 前三种方法主要都是体外制备siRNAs,并且需要专门...
近年来的研究表明,一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型, 称为RNA干扰(RNA interference,RNAi).siRNA(small interfering RNAs)就是这种短片断双链RNA分子,能够以序列...
生物物理所最新研究阐释细胞极化因子Par-3组装机理 6月4日,Structure杂志在其最新的一期上发表了中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室冯巍研究员与孙飞研究员合作完成的一项研究成果。该项研究成果综合了蛋白质晶体学、低温电镜三维重构技术、...
科技日报北京5月23日电 (记者王郁)记者今天从北京师范大学生命科学学院获悉,该院邱小波教授领导的研究团队发现乙酰化,而不是泛素化,介导了组蛋白通过特异的蛋白酶体降解。相关论文发表在最新一期国际著名期刊《细胞》上。该发现修正了科学界关于体细胞...
你可能会认为不管做任何事情,自己遗传的DNA都是不会受影响而改变的,但在某种意义上说,这一想法是错误的。在三月Cell出版社的《细胞代谢》杂志上,研究人员发表报告称当身体处于健康状态时,不怎么运动的男性和女性在运动锻炼几分钟后,他们体内的DNA会出...
在一项新的研究中,来自英国约克大学和赫尔大学的研究人员发现维生素A能够有助于治疗和阻止前列腺癌扩散.相关研究结果于2013年4月15日在线发表在Oncogenesis期刊上,论文标题为Retinoic acid represses invasion and stem cell phenotype by induction of th...
作者:佚名 来源:中国化工仪器网 2013-4-8 16:06:36 在量子信息和量子测量技术迅猛发展的今天,对量子奇异世界的探索已成为各国研究学者的不懈追求。上海交通大学物理系朱卡的教授团队和李金金博士发明的光秤却与众不同,因为它以量子光学和纳米材料为研究...