实验原理 TP53是重要的抑癌基因。在多种肿瘤中都能发现TP53基因突变及功能丧失。我们将针对TP53基因设计的靶点构建到pCas9/gRNA1载体，转染293T细胞，构建了TP53基因敲除293T细胞系。 1、本实验基因敲除原理：pCas9/gRNA1载体表达gRNA和Cas9蛋白。将靶点序列...

通过采用Cas9 D10A突变蛋白，对DNA进行单链而不是双链切割，解决CRISPR/gRNA系统中的脱靶问题。...

1、反应后无扩增曲线出现 确认程序中是否设置了信号采集步骤：两部法扩增程序一般将信号采集设置在退火延伸阶段；三步法扩增程序应当将信号采集设置在72℃延伸阶段。 扩增效率问题：电泳检测realtimePCR反应产物，观察是否有正确大小的目的条带出现。如果没...

实时荧光定量PCR（RealtimePCR，QPCR）技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程， 最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。荧光定量PCR（real-time quantitative PCR）技术实现了PCR从定性到 定量的飞跃，它以...

小 RNA 的鉴定、检测和使用在过去的几年中得到了迅猛的发展。我们在小鼠的睾丸中研究了这两个内在相关的领域。首先，通过基因芯片和小 RNA 文库筛选系统，一组组织特异性和时间短期表达变化的调节性小 RNA 被鉴定出来。其次，小的双链小干扰 RNA ，是一种下...